Прокариотные микроорганизмы

Действие биологических факторов проявляется в антагонизме микробов, когда продукты жизнедеятельностиодних микробов обусловливают гибель других. Антибиотики - разновидность химиотерапевтических препаратов - хим в-ва, выделяемые некоторыми микроорган и подавляющие рост и развитие тех или иных микробов. По происхождению антибиотики можно разделить на четыре группы:1.Антибиотики, выделенные из грибов. Грибы и актиномицеты являются наиболее активными продуцентами антибиотиков. Так, Pinicillium notatum выделяет антибиотическое в-во -- пенициллин, Stгерtоmyсеs rimosus -- окситетрациклин (террамицин). 2.Антибиотики, выделенные из бактерий. Имеют меньшее практическое значение, т.к. эффективность их ниже, чем антибиотиков грибного происхождения. Продуценты антибиотиков - разнообразные бактерии. В большинстве это сапрофиты, обитающие в почве и обладающие ярко выраженной биохимической активностью. К ним относятся грамицидин, полимиксин и др. Большинство антибиотиков токсичны при парентеральном введении, поэтому применяются местно. З. Антибиотики животного происхождения: эритрин, выделяемый из эритроцитов различных животных, лизоцим - полисахарид, полученный из яичного белка. Клетками некоторых тканей продуцируется интерферон, угнетающий жизнедеятельность многих возбудителей вирусных инфекций. 4.Антибиотики растительного происхождения. Фитонциды -- ядовитые в-ва, выделяемые растениями (лук, чеснок, алоэ, крапива и др.). Это летучие в-ва, обладающие антибактериальными св-вами в отношении многих м микроорганизмов: стафилококков, стрептококков, кишечной палочки и др. Характерным св-вом антибиотиков является избирательность их действия на микробную клетку. Антибиотики поражают лишь клетки микроорганизмов. Существуют антибиотики, действующие на немногие виды микроорганизмов (пенициллин), и антибиотики, имеющие широкий спектр антимикробного действия (тетрациклин). По механизму действия на микробов антибиотики делятся на бактерицидные, убивающие бактерий (пенициллин, стрептомицин), и бактериостатические, задерживающие рост микробов (все прочие антибиотики). По действию на микроорганизмы их можно разделить на 2 группы: нарушающие синтез клеточной стенки и ее мембран; нарушающие синтез ДНК, РНК и белка. Чувствительность микроба к антибиотикам проверяется методами: 1) серийных разведений в жидкой или на плотной среде и 2) диффузии в агар с применением дисков, содержащих антибиотики. Устойчивость микробов к антибиотикам. Антибиотик наносит лишь первое повреждение возбудителю заболевания. Окончательная ликвидация инфекционного процесса осуществляется микроорганизмом, мобилизующим защитные силы на борьбу с возбудителем болезни. Прежде чем применять антибиотик, ветврач должен хорошо изучить его св-ва, знать, при каких заболеваниях он используется. Иначе могут возникнуть последствия - токсикозы, раздражение желудочно-кишечного тракта и т. п. Не следует слишком увлекаться антибиотикотерапией, т.к. неумеренный прием этих веществ может вызвать развитие суперинфекций - заболеваний, связанных с нарушением нормальных взаимоотношений между обитателями животного организма. В этом случаи угнетается возбудитель инфекции и нормальная микрофлора организма. Начинает усиленно размножаться нечувствительная к антибиотику микрофлора, вызывая дисбактериоз, колиты и др. Ко многим антибиотикам развивается аллергия. Целый ряд микробов под влиянием антибиотиков утрачивают чувствительность к тому или иному антибиотику и образуют антибиотико-резистентные формы. У таких микробов изменяются ферментативные св-ва и антигенная структура, что приводит к усилению вирулентности. Применение антибиотиков бессмысленно. С целью предотвращения возникновения резистентных микробов при лечении необходимо комбинировать антибиотики или использовать их в сочетании с другими химическими средствами.

13.Внешняя форма прокариотных микроорган

По форме клеток бактерии подразделяются на три основные группы: шаровидные, или кокки, палочковидные и извитые. Кокки - имеют вид правильного шара, эллипса, боба, от взаимного расположения клеток после деления различают: микрококки, стафилококки, диплококки, стрептококки, тетракокки и сарцины. Образуются при делении в одной плоскости. Микрококки делятся в равных плоскостях и располагаются одиночно, парами или беспорядочно. Стафилококки - делятся в различных плоскостях и располагающиеся несимметричными гроздями. Диплококки - делятся в одной плоскости, образуя попарно соединенные кокки. Стрептококки - кокки, расположенные в виде цепочки. Тетракокки - делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях и располагаются по 4. Сарцины - делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и образуют правильные пакеты по 8--1б клеток и более. Палочковидные - имеют осевую симметрию и цилиндрическую форму тела с округлыми или заостренными концами. Делятся на две группы: неспоровые палочки - бактерии и палочки, образующие споры, - бациллы. Палочки, у которых диаметр споры превышает ширину вегетативной клетки - клостридии из-за своей веретенообразной ф-мы. В зависимости от взаимного расположения клеток палочковидные бактерии подразделяют на одиночные и бессистемные скопления, диплобактерии и диплобациллы (располагающиеся попарно), а также стрептобактерии и стрептобациллы (формы, образующие длинные или короткие цепочки). К палочковидным формам т/ж относят коринебактерии и фузобактерии. Коринебактерии - прямые или изогнутые палочки с булавовидными утолщениями на концах. Фузобактерии -- длинные, толстые, с заостренными концами палочки. Извитые - обладают спиральной симметрией. К ним относятся вибрионы, спириллы и спирохеты. Вибрионы - цилиндрическая изогнутая форма, тело представляет один неполный завиток в виде запятой. Спириллы - имеют форму спирально извитых палочек с 4-6 витками. Спирохеты - эластичные спиралевидные длинные клетки, состоящие из осевой нити (аксистиля), цитоплазмы с рибосомами и включениями, нуклеоида, мезосом, цитоплазматической мембраны и клеточной стенки. По кол-ву осевых фибрилл различ: спирохеты (более 100), кристиспиры (более 100), трепонемы (1-4), боррелии (15-20), лептоспиры (2).

14.Роль отечественных учёных в развитии микры

Велика заслуга в развитии микробиологии Мечникова. К числу важнейших работ в области микробиологии относятся его исследования патогенеза холеры человека, туберкулеза. Он является основоположником учения о микробном антагонизме, ставшем основой для развития науки об антибиотикотерапии. Обосновал теорию долголетия и предложил для продления человеческой жизни использовать простоквашу, которая впоследствии была названа мечниковской. Он организовал первую в России бактериологическую станцию. Развитил нового направления в микробиологии - иммунологию - учения о невосприимчивости организма к инфекционным болезням. Создал фагоцитарную теорию иммунитета, раскрыл сущность воспаления как защитной реакции организма. Гамалеи - открыл птичий вибрион (холероподобное заболевание птиц), названный в честь Мечникова его именем. Гамался впервые наблюдал и описал явление спонтанного лизиса бактерий под влиянием бактериофага, принимал активное участие в создании первой бактериологической станции в России и ввел в практику прививки против бешенства. Габричевский первым начал читать курс бактериологии в Московском университете. Выпустил учебник «Медицинская микро6иология», создал в Москве первый бактериологический институт. Изготовливал противодифтерийную сыворотку. Установил значение гемолитического стрептококка как возбудителя скарлатины, разработал и предложил вакцину против неё. Изучил кишечную палочку и се роль в патологии человека. Ценковский впервые установил близость бактерий и сине-зелёных водорослей и описал явление симбиоза; обосновал классификацию микробов, отнеся бактерий к растительным организмам; открыл возбудителя клека и разработал способы его предупреждения в сахарном производстве. Изготовил вакцины против сибирской язвы. Ивановский создал новый раздел - вирусологию. Установил возбудителя мозаичной болезни табака, получивший название фильтрующегося вируса. Виноградский разработал накопительные питательные среды, выделил и изучил азотофиксирующие и нитрифицирующие бактерии почвы, установил роль микробов в круговороте азота, углерода, фосфора, железа и серы; впервые доказал существование бактерий, самостоятельно синтезирующих органические ве-ва, что позволило открыть новый тип питания микробов -- аутотрофизм. Михин открыл возбудителя лептоспироза крс, разработал методику изготовления формолвакцины против паратифа телят и противоколибактериозной сыворотки, а т/ж методику гипериммунизации лошадей при получении противосибироязвенной сыворотки. Он является автором учебника «Курс частной микробиологии для ветеринарных врачей и студентов».

15. Микроскопические грибы (строение, св-ва, способы размножения)

Свойства: почти все они аэробы; источник азота - белки, пептоны, аминокислоты, нитраты. Гетеротрофный тип питания. Вегетативное тело грибов - грибница, или мицелий, состоит из ветвящихся нитей - гифы. У высших грибов мицелий септирован (гифы разделены поперечными перегородками - септами на отдельные участки). Гифы способны расти в длину и развиваться на поверхности или внутри питательного субстрата. Различают: субстратный мицелий (врастает в питательную среду); воздушный мицелий (на конце располагаются органы плодоношения). Клеточная стенка грибов толстая, прочная содержит целлюлозу и хитин. Она многослойная, включает до 10 слоёв, поддерживает осмотическое давление в клетке, определяет избирательную проницаемость стенки и является главной защитой от неблагоприятных факторов. Цитоплазматическая мембрана трёхслойная и участвует в обмене вещ-в. В цитоплазме располагаются 1 или несколько ядер с двойной мембраной и с ядрышками, с хромосомами, митохондрии, лизосомы, вакуоли, рибосомы, гликоген. В клетках грибов отсутствует крахмал, одним из продуктов метаболизма является мочевина. У грибов различают 3 типа размножения: 1) вегетативное размножение - у неветвящихся грибов происходит почкование, у ветвящихся - образуются различные виды эндоспор (артроспоры - образуются при распаде гифов, хламидоспоры - при распаде гиф, покрыты толстой оболочкой, бластоспоры - в результате почкования с последующим отделением клетки от родителя). 2) бесполое размножение - у низших грибов формируются эндоспоры (спорангиоспоры), у высших формируются экзоспоры (конидии). 3) половое размножение - происходит слияние гаплоидных мужских и женских гамет. У низших грибов, живущих в воде, происходит слияние двух зооспор с образованием цисты. У высших грибов - слияние концов мицелия, если сливаются однополые клетки, то образуются зигоспоры, если разные клетки - ооспоры. У многоклеточных грибов после слияния разнополых клеток выявляется покоящаяся клетка - сумка - аск - в ней может образоваться 4-8 половых спор.

16. Микроскопические грибы (определение, классификация, практическое значен)

Грибы - без хлорофильные, низшие, эукариотические, хемоорганотрофные микроорганизмы. Различают: грибы-паразиты, сапрофиты, симбионты. Грибы по морфологическому признаку делятся на низшие и высшие. Низшие грибы имеют одноклеточный мицелий. Высшие - многоклеточный или септированный и гифы имеют перегородки - септы. Низшие грибы включают 4 класса: 1) зигомицеты (мукорозы). 2) оомицеты (фитофтороз). 3) плазмодиевые (кила капусты). 4) хитридиомицеты (рак картофеля). Высшие грибы: 1) септированные - многоклеточный мицелий или безмицелиальные гладкие грибы (дрожжи, пеницилиум). 2) базидиомицеты - созревание половых спор происходит на базидиях (съедобные ядовитые шляпочные грибы). 3) дейтеромицеты - несовершенные грибы - отсутствует половая стадия размножения (микотоксикоз, трихофития). Значение: зигомицеты используются в промышленности для получения антибиотика рамицина, аскомицеты используются как продуценты антибиотиков, ауколоидов, ферментов.

17.Рост и размножение прокариот. Кривая роста

Рост микробов - увеличение её m, происходящее в рез-те поступления пит в-в и синтеза из них сложных органических соединен. Под ростом у бакт подразумев не только рост отдельной кл, но и общее увеличение числа кл в рез-те размножения. Достигнув определённых размеров, кл прекращает свой рост и начинает размножаться. Размножение - способность микробов к самовоспроизведению, увеличению кол-ва особей микробной популяции. Размножаются простым поперечным делением. Типы деления бактерий. 1. клеточное деление опережает разделение, что приводит к образован многоклеточн палочек и кокков. 2. Синхронное клеточное деление, при котор разделение и деление нуклеоида сопровождается образование одноклеточных организмов. 3. Деление нуклеоида опережает клеточное деление, обуславливая образование многонуклеоидных бактерий. Разделение бактерий происходит 3 способами: 1) разламывание - когда кл ломается по всей ширине; 2) скользящее разделен - кл не ломается, а формируется перетяжка; 3) секущее разделение - кл ломается и складывается. Общую закономерность роста и размножения бактериальной популяции принято показывать графически в виде кривой, которая отражает зависимость логарифма числа живых клеток от времени. Эта кривая роста имеет S - образную ф-му и позволяет различить несколько фаз роста, сменяющих друг друга в определённой последовательности: 1) лагфаза - не наблюдается рост кл, не увеличив их кол-во, а иногда снижается; 2) фаза лагорифмического роста - удваивание кол-ва кл за определён время и этот промежуток времени наз периодом генерации. Он явл постоянным для каждого вида микроорганизма. В этот период кол-во молодых жив кл преобладает над кол-вом неживых кл. 3) стационарная фаза - число новых растущих кл = числу отмерших кл. 4) фаза отмирания - в среде преобладают токсические продукты обмена, мёртвых клеток больше, чем живых. У клеток могут наблюдаться Морфологич изменен (утрата жгутиков, гр+ красятся как гр-).

18. Нормальная и анормальная микрофлора молока. Санитарно - бактериологическое исследование молока

Качественный состав микрофлоры молока в момент его получения из вымени представлен молочнокислыми стрептококками и лактобактериями. В процессе жизнедеятеольности они сбраживают молочный сахар, образуя в качестве основного продукта брожения молочную к-ту. Иногда образуется углекислый газ, летучие к-ты (уксусная), ароматические в-ва (диацетил). Молочнокислые стрептококки - Streptococcus lactis, а т/ж Str. cremoris, используемый для изготовления сливок, масла и сыра. К кислотным стрептококка относят термофильный стрептококк Str. termophilus. При сбраживании молочного сахара образуется молочная к-та и небольшое кол-во ароматических в-в. Термофильный стрептококк применяется при производстве заквасок для йогурта, ряженки. Санитарно - бактериологическое исследование молока. Этот продукт может содержать различные патогенные микроорганизмы и служить источником заражения челов и жив. Молоко - хороший продукт, в котором микроорганизмы быстро размножаются. Степень обсеменённости молока бактериями зависит от санитарных условий содержания и кормления жив. Санитарно-биологич оценку молока выражают общим микробным числом и коли-титром, а т/ж наличием или отсутсвием патогенных бактерий и а/т к ним (кольцевая РА с молоком при бруцеллезе). Степень обсеменённости бактериями молока определяют пробой на редуктазу (р-ция восстановления - обесцвечивание метиленового синего). Коли - титр определ посевом 1 мл каждого разведения на ср Кесслера. Общее микробное число определяют последовательным разведением в 3-7 пробирок, из каждой пробирки берут по 1 мл и вносят в стерильную чашку Петри, заливают МПА, ставят в термостат.

19. Участие микроорган в круговороте углерода в природе

С02 входит в состав органических соединений, кот являются продуктами фотосинтеза. В воздухе его содержится немногим. Велика роль и поддержании равновесия и круговорота С02 микроорганизмов. Роль микробов в разложении клетчатки. В состав клетчатк) входит более 50 % всего органического углерода биосферы. После гибели растений она разлагается, в рез-те освобождается углерод. Разложение клетчатки происходит в аэробных и анаэробных условиях. Аэробное разложение - под влиянием актиномицеты и грибов родов аспергилл и пеницилиум. Анаэробное брожение происходит в два этапа: 1- клетчатка осахаривается, 2- сахар разлагается на спирты, молочную, масляную к-ты, водород. Два типа анаэробного брожения клетчатки - водородное и метановое, которые осуществляются бактериями - целлюлозоразрушителями. Брожение клетчатки происходит в преджелудках крс при поедании большого кол-ва зеленой массы бобовых. Разложение пектиновых в-в. Разрушение погибших растений происходит при активном участии микроорганизмов, разрушающих пектиновые межклеточные в-ва, связывающие растительные клетки. Пектиновое брожение - рода бацилла и клостридиа. Спиртовое брожение. При спиртовом брожении микроорган превращают углеводы с образованием этилового спирта и углекислоты - культуральные дрожжи. Их делят на пылевидные (клетки отдельны, изолированы) и хлопьевидные (кл склеены). Пылевидные используют для производства спирта, хлопьевидные в виноделии и пивоварении. Молочнокислое брожение. Происходит распад углеводов, а также многоатомных спиртов и белков до молочной кислоты. Молочнокислые бактерии делятся на гомоферментативные и гетероферментативные. Гомоферментативное молочнокислое брожение. Бактерии образуют только одну молочную кислоту, что обусловлено кокковыми и палочковыми молочнокислыми бактериями. Кокковые формы - род стрептоксоков: стрептококус лактис - клетки овальной формы, расположенные в виде цепочек, неподвижный, гр+. Кроме моносахаридов, сбраживает лактозу и мальтозу. Палочковые бактерии род лактобациллюс. Гетероферментативное. Его осуществляют представители родов лактобациллюс - небольшие палочки, гр+. При сбраживании глюкозы - молочная к-та, другие органич продукты и СО2. Пропионово-кислое брожение. Осуществляется бактериями рода пропионибактериум - неподвижные палочки, полиморфные, гр+, спор не образуют, анаэробы. Источниками Е для них - углеводы, органические к-ты, спирты и др в-ва. Конечные продукты брожения - пропионовая и уксусная к-ты. Бактерии используют для получения вит В12. Маслянакислое брожение бактерии из рода клостридий - крупная палочка, подвижна, гр+, образует споры, анаэроб. Брожение начинается с разложения сахаров в пировиноградную к-ту. Это брожение бывает нежелательным - прогоркание растительных масел и жиров животного происхождения. Уксуснокислое окисление -процесс, при котором этиловый спирт окисляется до уксусной к-ты под влиянием уксуснокислых бактерий - род ацетобактер - короткие палочки, неподвижные, гр-, нет спор, аэробы. Используют для производства пищевого уксуса из вина и спирта в промышленных условиях. При силосовании кормов.

20. Участие микроорган в круговороте азота в природе

N - важнейший биогенный элемент, входящий в состав белковой молекулы каждого живого существа. Запасы газоо6разного азота в атмосфере огромны. Однако ни растен, ни жив он не доступен, т.к. растения могут использовать для питания N минеральных соединениq, а жив в ф-ме органич соединен. Цикл превращений N в природе с участием микроорганизмов состоит из 4 этапов: фиксации атмосферного N, аммонификация, нитрификация и денитрификация. Фиксация атмосферного N. Способностью фиксировать атмосферный N и строить из него тело своей клетки обладают азотофиксирующие микроорганизмы. Они обусловливают повышение плодородия почвы: 2 группы микроорганизмов: свободноживущие (Clostridium pasteurianum) и микроорганизмы симбионты (род Rhisobium). Clostridium pasteurianum - полиморфные полочки, подвижные, гр+ анаэробы, образуют споры. Rhisobium - подвижны, палочки гр-, спор не образуют, при старении теряют подвижность. Аммонификация белков. Значительные запасы органического N сохраняются в растит и жив тканях. Когда гибнут растения и животные, компоненты их тела подвергаются действию микроорган, и азотистые соединения разрушаются с образованием аммиака - аммонификация. Процесс может происходить в аэробных и в анаэробных условиях при участии разнообразных микроорганизмов: бацилл, клостридий, актиномицетов. Расщепление белковых в-в происходит за счет протеолитических ф-тов, выделяемых микроорганизмами, получивших название гнилостных. При аэробном конечными продуктами являются: аммиак, С02, сульфаты и вода. В анаэробных- аммиак , С02, органические к-ты, индол. Аэробные аммонофикаторы: Bac. subtilis - палочка, подвижная, гр+, образует споры. Анаэробные аммонофикаторы - Cl. putrificum - палочка, подвижная, гр+. Аммонификация мочевины. Мочевина непригодна для азотистого питания растений, и только после разлежения её микроорганизмами она становится усвояемой. Бактерии, разлагающие мочевину - уробактерии. Мочевина превращается в аммиак и СО2. к ним относ: Bac. probates - крупная палочка, подвижная, гр+, образует споры. Нитрификация. 2 фазы. 1 фаза - окисление солей аммония до солей азотистой к-ты (род Nitrococcus). 2 фаза- окисление азотистой к-ты до солей азотной к-ты (род Nitrococcus). Образовавшаяся азотная к-та вступает в соединение с щелочами, в рез-те образуется селитра. Она хорошо растворяется в воде и усваивается растениями, в рез-те повышается плодородие почвы. Денитрификация. Обратный нитрификации. Различают прямую и косвенную денитрификацию. Прямая вызывается бактериями, широко распространенными в почве. Денитрифицирующие бактерии восстанавливают нитраты до молекулярного азота. Косвенная осуществляется чисто хим путем при взаимодействии азотистой кислоты с аминными соединениями. Роль микробов в этих процессах косвенная и сводится к образованию нитратов.

21. Морфологические и физиологич особенности риккетсий, хламидий и микоплазм

Риккетсии - облигатные внутриклеточные паразиты эукариот; гр- бактерии, имеющие форму коротких палочек с закругленными концами и кокков, иногда нитей. Клеточная стенка содержит пептидогликан, цитоплазматическая мембрана характеризуется высокой проницаемостью. Имеют рибосомы, нуклеоид, размножаются в цитоплазме, реже в ядре пораженных клеток хозяина поперечным делением, нитевидные формы - дроблением. Хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты млекопитающих и птиц со сложным циклом развития. Гр- бактерии, имеющие форму кокков, В процессе развития проходят 3 стадии: элементарного тельца (шаровидной ф-мы, имеют компактный нуклеоид и ригидную 3-х слойную клеточн стенку, кот устойчива к осмат Р, к механ воздействиям, трипсину; способны склеивать эритроциты; способны выживать во внешн среде), ретикулярное тельце (сферическое образование, имеющ сетчатую структуру с тонкой клеточн ст и фибриллярный нуклеоид) и промежуточное тельце (промежуточная стадия между элементарн и ретикулярн тельцем). Элементарное тельце - инфекционная ф-ма, а ретикулярн - вегетативная (размножается путём бинарного деления внутриклеточно). Микоплазмы - мельчайшие свободноживущие прокариоты без ригидной клеточной стенки. Роль клеточной стенки у них выполняет 3-х слойная цитоплазматическая мембрана.

Основным липидным компонентом мембраны являются стерины, в цитоплазме располагаются рибосомы и нуклеоид. Микоплазмы не синтезируют пептидогликан. Обладают выраженным полиморфизмом - от мелких сферических, кольцевидных клеток до нитевидных, ветвящихся мицелиальных форм. В культурах на жидких питат ср обнаруживаются шаровидные образования, их называют элементарными телами, они являются минимальными репродуцирующими единицами. Все микоплазмы гр-. Фильтруются через бактериальные фильтры. Большинство фак анаэробы, но т/ж аблигатные аэробы. Могут расти как на бесклеточн, так и клеточн пит ср. Размнож путём бинарного поперечного деления.

22. Актиномицеты (св-ва, практическое значение)

Актиномицеты (лучистые грибы) одноклеточные гр+ бактерии. Их тело (мицелий) состоит из тонких и длинных гиф (нитей), способных к истинному ветвлению: гифы могут быть прямыми или спиралевидными и имеют единую с основной нитью оболочку и протопласт. На плотных средах актиномицеты образуют субстратный, врастающий в среду, и воздушный мицелий. Кроме мицеллярных встречаются палочковидные и кокковидиые формы. Строение аналогично гр+ бактериям, клеточн стенка содержит пептидогликан и не имеет, как у грибов, хитина и целлюлозы. Размножаются при помощи спор (конидий); из отдельных ветвей зрелых гиф воздушного мицелия образуются спороносцы, которые в результате сегментации превращаются в споры. В благоприятных услов они прорастают в вегетативные клетки. Гетеротрофный тип питания и аэробный тип дыхания, встречаются также и анаэробы. Отдельные виды синтезируют пигменты: розовый, желтый, синий и др. Обитают преимущественно в почве, обнаруживаются в воде, на растениях, коже и слизистых оболочках животных, разлагают органические субстраты, в том числе недоступные для др микроорган. Играют важную роль в круговороте в-в и Е, образовании почвы и ее плодородии. Многие служат продуцентами антибиотиков, витам, аминок-т, ферментов. Большинство сапрофиты, но есть и патогенные. К ним относится Actinomyces bovis -- возбудитель актиномикоза крс.

23. Культивирование анаэробных микроорганизмов в условиях лаборатории

Микроорганизмы, выращенные на искусственных пит ср - микробными культурами, а получение их роста на пит ср - культивированием. Для культивирования необходимы условия: оптимальный температурный режим с учетом, к какой группе относится исследуемый вид бактерий, соответствующие пит ср, аэробиоз (или анаэробиоз). Для обеспечения постоянной оптимальной температуры служат термостаты. Лабораторный термостат - шкаф с двойными стенками, снаружи облицованный материалом непроводником тепла (пластик), внутренняя стенка металлическая. Между двумя металлическими стенками находится вода (или воздух), подогреваемая электричеством. От нагретой воды через внутреннюю металлическую стенку тепло поступает в термостат. Внутри имеются сетчатые полочки, на которых размещают штативы с пробирками, чашки Петри и др. Постоянная температура поддерживается при помощи терморегуляторов - при достижении температуры заданного уровня автоматически происходит отключение прибора; при снижении температуры термостат вновь включается автоматически. Помимо обеспечения температурного режима, следует учитывать тип дыхания микроорганизмов: при аэробном типе дыхания никаких дополнительных условий создавать не нужно. Для анаэробов необходимо исключать доступ кислорода. С этой целью используют эксикатор или анаэростат. Эксикатор - стеклянный сосуд с притертой крышкой. Крышка может быть сплошная или с отверстием в центре. В отверстие вставляют пробку, в неё стеклянные канюли с резиновым шлангом для подключения к насосу для выкачивания воздуха. Создание анаэробиоза можно осуществить физическим, химическим и биологическим методами. Физический - из герметично закрытого эксикатора выкачивают воздух и помещают его в термостат. Используют анаэростаты - металлический, герметически закрывающийся сосуд, снабжённый кранами для удаления воздуха и вакуум-манометром. Используются термоанаэростаты -анаэростат, нагреваемый, как термостат. Хим способ - используют эксикатор без отверстия. На дно ставят чашку Петри с хим в-вами, которые активно связывают кислород воздуха. Сверху ставят подставку с отверстиями, а на нее -- пробирку или чашки Петри крышку плотно закрывают. Биологический - совместном выращивании анаэробов и аэроб.

24.Питательные среды для культивирования прокариот и эукариот. Химический состав, способы приготовления, классификация

Питательные среды различают по консистенции жидкие, полужидкие, плотные (твердые); происхождению - животного или растительного и синтетические питательные среды (определенного состава); по назначению: 1) универсальные; 2) специальные: а) для культивирования отдельных видов, не растущих на обычных ср; б) дифференциально-диагностические- для определения особенностей бактериальных культур (сахаролитических, протеолитических св-в); в) селективные - для выделения микробов одного вида из исследуемого материала; г) элективные среды (избирательные); д) среды накопления, в кот подавляется рост сопутствующих бактерий и беспрепятственно развивается, накапливается искомый вид, содержавшийся в небольшой концентрации. Широко применяют среды животного происхождения - МПБ, МПА, МПЖ. К любым пит ср предъявляются требования: стерильность, оптимальная рН, наличие в среде необходимых пит в-в, достаточная влажность. Приготовление универсальных пит ср. МПБ жидкая пит ср, прозрачная. Исходный материал - мясная вода: свежее говяжье мясо нарезают мелкими кусочками, заливают водой 1 : 2; экстрагируют 24 ч, варят 1,5-2 ч, выкипающее кол-во жидкости доливают водой, фильтруют в колбы, закрывают пробками и стерилизуют в автоклаве 30 мин. Добавляют пептон и NaС1. Так как мясная вода имеет слабокислую реакцию, при изготовлении МПБ бульон подщелачивают (добавляют КОН), кипятят 2-3 мин. МПА- плотная пит ср. К МПБ добавляют промытого мелко нарезанного А (безазотистое органическое в-во, получаемое из морских водорослей), расплавляют А, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Чтобы А не уплотнился, фильтрацию проводят в аппарате Коха или пользуются специальной металлической двустенной воронкой, внутрь которой (между стенками) заливается горячая вода. Разливают по пробиркам, стерилизуют 30 мин в автоклаве. Пробирки раскладывают в наклонном положении, оставляют при комнатной температуре, среда уплотняется, становится твердой. ПМПА готовят как МПА только добавляют меньше А. Кипятят до расплавления, фильтруют, стерилизуют в автоклаве. Приготовление специальных пит ср. МПЖ. К МПБ добавляют желатины, расплавляют её, фильтруют, разливают в пробирки, стерилизуют текучим паром. МППБ Китта - Тароцци. Готовят печеночную воду: печень крс нарезают мелкими кусочками, заливают водой 1:1, кипятят, фильтруют, стерилизуют. Её смешивают с МПБ 2:1. Кипятят, разливают по пробиркам. Перед разливом в пробирки кладут кусочки варенной печени, сверху среды заливают 1-2 мл вазелинового масла, стерилизуют в автоклаве 30 мин. Сахарный МПБ. К МПБ добавляют глюкозы, разливают в пробирки, стерилизуют текучим паром 20 мин. Сахарный МПА. К расплавленному МПА добавляют глюкозы, разливают в горячем виде, стерилизуют. Сывороточный МПБ и МПА. Сыворотку крови добавляют к МПБ в колбочках; если сыворотку добавить к расплавленному МПА - сывороточный А- разливают в чашки. Кровяной МПА. Полученную дефибринированную кровь добавляют к расплавленному МПА, перемешивают, разливают в чашки. В термостат дном вверх. Дифференциально-диагностические ср. Ср Гисса. Основой явл пептонная вода (NаС1, пептон, растворенные в дистиллированной воде), к ней добавляют углеводы и индикатор Андредэ (р-р фуксина, р-р NаОН в дистиллированной воде), фильтруют, разливают в пробирки с поплавками. Стерилизуют текучим паром. Среда Эндо. МПА расплавляют, добавляют лактозы, фуксин, обесцвеченный сернокислым Na. Всё кипятят и разливают по чашкам. Агар Левина - А Хоттингера с р-ром метиленового синего, бактериологическим щелочным эозином, лактозой, двуосновным фосфорнокислым калием. Порошок ср Левина растворяют в воде, кипятят 5 мин, разливают по чашкам. В термостат. Селективная и дифференциально-диагностическая среда Плоскирева - А, содержащий лактозу, соли желчных к-т, кальцинированную соду, бриллиантовую зелень, NаС1, индикатор нейтральный красный, для получения среды сух порошок разводят в дистиллированной воде. Висмут-сульфит-агар: МПА, содержащий цитрат висмута, сульфит натрия, дифосфат натрия, бриллиантовую зелень, глюкозу, кальцинированную соду. Сух в-во разводят в дистиллированной воде, охлаждают, взбалтывают, разливают по чашкам Петри. В термостат. Молоко - слегка подщелачивают двууглекислой содой, фильтруют, разливают в пробирки, стерилизуют текучим паром. Среды накопления. Среда Шустовой - МПА с добавлением водного р-ра натрийтиосульфата и р-ра Люголя. Растительные питательные среды. Картофельные ср - картофель очищают, нарезают, погружают в р-р двууглекислой соды на 1-2 ч, просушивают фильтровальной бумагой и помещают в пробирки Ру. На дно пробирки до перетяжки наливают глицеринизированную воду. Стерилизуют 20 мин.

25. Санитарно - бактериологическое исследование воды и воздуха. Практическое значение

Санитарная оценка воды выражается общим микробным числом, качественным и количественным определением загрязнённости ее бактериями группы кишечной палочки. Определение общего количества бактерий в воде. Из открытых водоемов делают последовательные разведения по общепринятой методике - 1 мл воды переносят в пробирку с 9 мл водопроводной воды, размешивают ее и 1 мл переносят в следующую пробирку. Всего 3-7 разведений. Из каждой пробирки берут по 1 мл и вносят в чашку Петри, заливают расплавленным МПА. Ставят в термостат. Кол-во колоний рассматривают под лупой. Определение коли-титра. - наименьшее количество воды, в которой обнаруживают кишечную палочку. Для определения используют бродильную пробу и метод мембранных фильтров. Бродильная проба - воду в определенных количествах высевают на среду накопления, затем при наличии роста, характерного для кишечной палочки, пересевают на дифференциально-диагностические среды. Метод мембранных фильтров чаще применяют в лабораторной практике - определенный объем воды пропускают под давлением через фильтры %3, изготовленные из нитроцеллюлозы, с последующим наложением их матовой стороной на поверхность А Эндо, выдерживанием в термостате. Затем выросшие колония подсчитывают, изучают, определяют коли-титр и коли-индекс. Исследование воздуха. Воздух является благоприятной средой для обитания микроорганизмов. Для санитарной оценки воздуха учитывают общее кол-во микробов в 1 м? и качественный состав. Данное исследование осуществляют седиментационным, фильтрационным и аспирационным методами. Седиментационный метод оседания Коха - в чашки Петри с МПА оставляют открытыми на 5 мин в помещении, закрывают, надписывают, в термостат, подсчитывают колонии микробов.Чтобы определить микробное число в воздухе (количество бактерий, содержащихся в 1м?), его подсчитывают по формуле Омелянского: Х =/вгде Х - кол-во микробов в 1 м? воздуха; а - кол-во выросших колоний в чашках; в - площадь чашки; Т - время, в течение которого чашка была открыта; 5 - время по правилу Омелявского; 10 - объем воздуха в литрах. Правило- на поверхности А в чашке Петри с площадью 100 см? за 5 мин из воздуха оседает такое кол-во микробов, которое находится в его 10 л. Фильтрационный метод (с использованием бактерноуловителей Дьяконова, трубок Микеля, мембранных фильтров) - пропускают через специальную систему определенный объем воздуха. Бактериоуловитель - сосуд со стеклянными бусами и с жидкой средой, закрытый пробкой. Через пробку пропущены 2 трубки: одна до дна, другая - не касается жидкости и соединена резиновым шлангом с разрежающим насосом, снабженным манометром. Пропускают воздуха через систему, содержимое сосуда взбалтывают и 1 мл жидкости вносят в чашку Петри с расплавленным А, выдерживают в термостате, подсчитывают колонии. Полученное число умножают на объем жидкой среды в сосуде, делят на количество литров пропущенного воздуха и умножают на 1000 (кол-во литров воздуха в 1м?). Мембранный метод. После пропускания воздуха через мембранные фильтры фильтрующие мембраны накладывают на поверхность А в чашке Петри, культивируют в термостате, подсчитывают кол-во выросших колоний. Полученное число делят на кол-во литров пропущенного воздуха и умножают на 1000. Аспирационный метод с использованием аппарата Кротова - цилиндрической формы металлический сосуд, внутри которого вмонтирован электромотор с центробежным вентилятором и вращающимся диском. Корпус прибора закрывается крышкой с радиально расположенной клиновидной щелью. При вращении вентилятора воздух засасывается через щель крышки, ударяется о поверхность пит ср, вращающейся на диске чашки Петри, и содержащиеся в струе воздуха бактерии оседают. Имеющийся в приборе ротаметр указывает кол-во пропущенного воздуха. Затем чашки помещают в термостат. Подсчитывают кол-во выросших колоний и микробное число воздуха.

26. Классификация микроорган по Берги. Номенклатура микроорган. Понятие о виде микроорган

Классификация Берги 1923г. систематика занимается всесторонним описанием видов микроорган, выяснен степени родственных отношений между ними и объединен их по Ур-ню родства в классификационные единицы или таксоны. Осн и самой низшей таксономич единицей явл вид микроорган - род, семейство, порядок, класс, отдел, царство. Вид - совокупность родственных микроорган, имеющ единое происхожден и генотип, сходных по Морфологич и биологич св-вам и обладающ наследственно закрепленной способностью вызывать в среде естественного обитания определ специфич процессы. В основе систематики лежат признаки: 1) Морфологич признаки - величина, ф-ма, хар-р взаиморасположения кл. 2) Тенкториальные св-ва - способность окрашив различн красителями, особенно гл признаком явл отношен к окрашиван по Грамму. 3) Культуральн св-ва - особенности роста бактерий на жидких и плотных средах. 4) Подвижность бактерий - подвижны и неподвижны. Подвижн подразделяются - ползающие, скользящие - передвигаются за счёт волнообразн сокращен кл; плавающ бактерии, у кот подвижность связана с наличием жгутиков. 5) Спорообразован: спорообразующ бактер - учитыв размер спор, её расположен в кл; споронеобразующие. 6) Физиологич св-ва - по способу питания - автотрофы, гетеротрофы; по азотному питанию - аминоавтотрофы, аминогетеротрофы; тип дыхания - аэробный, анаэробный, факультат анаэробы, микроаэрофильные. 7) Биохимич св-ва - способность ферментировать различные у/в; протеолитическая активность - способность разлагать белковые образован; образован индола, сероводорода, аммиака и др. 8) Чувствительность к специфическим бактериофагам. 9) Антигенные св-ва - зависят от химич состава клеточн стенки и жгутиков бактерий. 10) Химич сост клеточн стенки - учитыв содержан и состав сахаров и аминок-т.

27. Ферменты микроорган (св-ва, классификация, обнаружение сахаролитич и протеолитич ферментов у микроорган)

Гл св-ва: специфичность и термолябильность. У микроорганизм набор ф-тов генетически закреплён и передаётся по наследству. Различ ф-ты: 1. экзоф-ты - выдел кл во внешн среду и катализир разложен сложных в-в субстрата до более простых. 2. эндоф-ты - локализуются в самой кл и участвует во внутриклеточн процессах обмена в-в. 3. конститутивные - явл постоян компонентом кл и могут быть обнаружены даже при отсутствии в среде субстрата, кот они катализируют. 4. адаптивные - вырабатываются кл только тогда, когда в среде появл соотвествующий субстрат. Различают: оксиредуктазу, трансферазу, гидролазу, лиазу, изомеразу, лигазу и киназу. Наличие ф-тов можно обнаружить с помощью спец сред. Сахаролитические св-ва выявляют при посеве бактерий на дифференциально - диагностические среды с разными углеводами и индикатором. Чаще применяют среды Гисса (с индикатором Андредэ). Набор сред с разными углеводами (Г, Л, мальтоза, С, маннит, дульцит, арабиноза, сорбит и др.), стерильное обезжиренное молоко, молоко с лакмусом, молоко с метиленовым синим - пёстрый ряд. Посевы культур осуществляют по общепринятой методике бактериологической петлёй. После инкубирования в термостате учитывают рез-тат ферментации углеводов: изменение цвета пит ср (в красный цвет при индикаторе Андредэ) означает расщепление углевода и образование в среде кислых продуктов распада, а т/ж газообразные в-ва. Для определения сахаролитических св-в часто применяют полужидкие ср с углеводами и индикатором ВР (смесь водного голубого с розоловой к-той), а т/ж плотные среды с углеводами и индикатором (А Эндо, Левина, Плоскирева). Для выявления протеолитической способности микроорганизмов исследуемую культуру засевают в МПЖ, иногда пользуются свёрнутой кровяной сывороткой лошади, коагулированным белком куриного яйца. Посев микробов в застывшую столбиком МПЖ производят уколом, погружая иглу с культурой в глубь пит ср до дна пробирки. В тех пробирках, где под действием ферментов бактерий произойдет протеолиз желатины, среда разжижается. Микробы различных видов разжижают желатину неодинаково. Одни - в виде воронки (сибирская язва), другие - в виде чулка (стафилококки). Способность микроорганизмов гидролизовать казеин определяют на молочном А Эйкмана: Протеолиз проявляется пептонизацией казеина - вокруг колоний образуется четкая зона просветления молочного А. При посеве в молоко протеолиз выражается просветлением столбика молока, появлением осадка. Степень протеолиза и глубину расщепления белка у разных видов бактерий определяют по образованию конечных продуктов распада (индол, сероводород, аммиак и др.).

Страницы: 1, 2